病原学检查（补充件）

　　A1 血涂片检查

　　A1.1 吉氏液染色－光学显微镜（油镜）检查

　　A1.1.1 血片制作在洁净载玻片上涂制薄血膜与厚血膜。一般从耳垂或手指取血（婴儿可在足跟取血）。先用酒精棉球消毒取血部位，然后用一次性刺血针（或用折断半边的蘸水笔尖代替，但每次使用后经煮沸消毒）迅速刺入，轻压挤出血液。用推片边缘中部取少许（0.5～1.0μL）血液在载玻片上推制成薄血膜，再用推片的角，取血约4～5μL（火柴头大小的血滴），在同一载玻片上的适当位置涂制成直径为0.8～1.0cm的圆形厚血膜。自然干燥，用铅笔在薄血膜上、或用特种蜡笔在玻片反面编号。

　　A1.1.2 血片染色染色液用吉氏染粉10g、中性甘油500mL和纯甲醇500mL配制而成。配制时将吉氏染粉置大研钵中，逐步加入少量甘油，充分研磨后，置有色玻瓶中，用甲醇分数次洗出研钵中的甘油染液，倒入瓶内摇匀，在室温下放置3～5天，即可使用。染色前，先用甲醇固定薄血膜，将吉氏染液用pH7.0～7.2的水配成3％的稀释液，将血片插入染色缸内染色，或用滴管将此稀释液滴在厚、薄血膜上，染色30min.若需快速染色，可在2mL水中加吉氏染液3滴，染色6min.或先在厚血膜上加几滴清水溶去血红蛋白后滴加染液，效果更佳。染色后，用水轻轻冲洗，插在玻片板上晾干。

　　A1.1.3 血片镜检在染色血片上滴少许柏油，用光学显微镜（油镜）检查。应检查厚血膜为主，薄血膜主要用于原虫种类鉴别和原虫密度计数。染色后疟原虫核呈红色，胞浆呈蓝色。除环状体外，其他各期疟原虫均可查见褐色的疟色素。现症病人至少检查100个厚血膜视野，带虫者应查完整个厚血膜，未发现疟原虫判为阴性。以薄血膜中平均每100个红细胞中的原虫数或厚血膜平均每100个白细胞范围内的原虫数，推算每微升血中的原虫密度。

　　A1.2 瑞氏液染色－光学显微镜（油镜）检查

　　A1.2.1 血片制作参见A1.1.1。

　　A1.2.2 血片染色用瑞氏染粉0.2g，置于研钵内，加入中性甘油3mL，充分研磨，然后逐次加入少量甲醇至研钵内洗去染液，倒入有色玻璃瓶内，再在研钵内加甲醇冲洗，至用完100mL甲醇为止，摇匀过滤后即可使用。染色时，先在厚、薄血膜间用蜡笔划一条横线，在厚血膜上加清水2～3滴溶去血红蛋白，在薄血膜上直接加约1mL瑞氏染液染色2min，然后在薄血膜上加与染液等量的水稀释，并引到厚血膜上，使厚、薄血膜同时再染色5～6min，水洗晾干。本法不宜用于大量血片染色，但染色所需时间短，多用于医院门诊检验。

　　A1.2.3 血片镜检参见A1.1.3。

　　A1.3荧光素吖啶橙染色－荧光显微镜检查

　　A1.3.1 血片制作参见A1.1.1，但厚血膜应比吉氏液染色的厚血膜略薄，即用3μL血涂成直径为1.2～1.5cm的亚厚血膜；薄血膜则不宜过薄，可在涂片时推片以45°角涂成较厚的薄血膜。

　　A1.3.2 血片染色先用甲醇固定薄血膜，厚血膜用清水溶去血红蛋白。用吖啶橙1g，加pH6.5～7.0磷酸缓冲液100mL配制成1％吖啶橙母液。染色时，将吖啶橙母液0.1mL加生理盐水9.9mL配成万分之一稀释液。用滴管取稀释液2～3滴于血膜上，染色40～60s，加盖玻片。

　　A1.3.3 血片镜检用荧光显微镜（或普通光学显微镜加简便荧光光源装置代替）暗室检查。疟原虫和白细胞的核呈现黄绿色荧光，胞浆呈桔红色荧光。

　　A2 骨髓穿刺

　　按医院常规进行。本法一般不宜用于疟疾诊断，仅在特殊情况下用于鉴别诊断。