病原学诊断（补充件）

　　A1 病原检查

　　A1.1 髂骨穿刺

　　A1.1.1 病人侧卧，露出髂骨部位，用手指确定髂骨上棘，将该处周围皮肤用碘酒及酒精消毒，一般在局部麻醉下进行。

　　A1.1.2 穿刺针的大小，视病人年龄不同而异，婴儿及幼童用20号穿刺针，年龄较大的儿童及青年可用5cm长的18号腰椎穿刺针，成人用17号穿刺针，均需经压力蒸气灭菌。

　　A1.1.3 以髂骨前上棘后约1cm为穿刺处，先刺入皮肤，然后将针竖起，使与水平线成70°～80°，穿过皮下组织及骨膜后，即能觉出针头已触及骨的表面，可用旋转式的动作，将针尖钻入骨内。

　　A1.1.4 按病人年龄大小及胖瘦不同，穿刺的深度为0.5～1.0cm，由浅入深，只要放手后针不斜倒，表示针尖已入骨内，可将针轴拔出，接以2mL或5mL注射器，抽得骨髓后，应立即将穿刺针拔出，将骨髓制成涂片以便检查。

　　A1.1.5 骨髓涂片制成后让其自然干燥，用记号笔编号。染色前先用甲醇固定，将吉氏液以水配制成3％的稀释液，染色30min，或在2mL水中加吉氏液3滴，滴在涂片上，染色20min.然后用流水轻轻冲洗晾干，即可用光学显微镜（油镜）检查。

　　A1.2 淋巴结穿刺

　　A1.2.1 一般均选择腹股沟部位，其他部位的淋巴结如属肿大，亦可用作穿刺。

　　A1.2.2 淋巴结肿大处的局部消毒后，用洗净的左手拇指和食指捏住一个淋巴结，向上提起，并使其固定于两指之间，注意穿刺部位不得污染。右手取高压消毒的针头，先穿过皮肤，然后刺入淋巴结内，待数秒钟后即可将针头拔出，无需用针筒抽吸。

　　A1.2.3 将针内的淋巴组织液射在玻片上，由于所获的液体量甚少，应仔细作成涂片。

　　A1.2.4 涂片染色镜检：参见A1.1.5.

　　A1.3 皮肤刮片检查

　　局部皮肤消毒后，以洗净的左手拇指和食指捏住皮肤结节，使其固定于两指间，再用灭菌干燥手术刀轻轻切开皮肤，刮取切口两侧的皮肤组织，制成涂片，染色镜检。

　　A1.4 三恩基的制备：琼脂14.0g，氯化钠6.0g，蒸馏水900mL，盛入烧瓶中加热熔化，分装试管，每管3mL.经压力蒸气灭菌，待稍冷却后每试管加入相当1/3量的去纤维兔血，均匀混合后斜置待冷。冷却后每管加入0.5mL洛克氏溶液，4℃冷藏备用。

　　A1.5 原虫培养：在严格的无菌操作下，把抽吸到的骨髓、淋巴液注入培养基内，或切取皮肤黑热病患者的小块皮肤组织投入三恩基内，置22～24℃温箱内培养，15天后用白金耳取少量培养液置显微镜下检查，如查见利什曼原虫的前鞭毛体，即可确定诊断。