流感快速诊断方法
C1 直接检查呼吸道脱落上皮细胞内抗原
C1.1 原理
由于流感病毒的主要感染部位是在呼吸道上皮细胞，因此在病人呼吸道标本的脱落细胞中含有流感病毒抗原，通过直接检查脱落上皮细胞内抗原即可诊断。检查方法可采用免疫荧光法，一般于3～4h内即可完成，而且可以直接定型。
C1.2 标本的收集和制片
儿童标本最好采用负压抽吸法收集呼吸道分泌物，成人标本最好采用鼻咽洗液。可将每份标本分为两份，一份低温冻存备作病毒分离，一份用pH7.2磷酸缓冲液（PBS），将粘液吹打散，1500r/min离心15min去除上清，细胞沉淀用PBS洗1～2次，末次离心后弃上清，加入适量pH7.2 PBS使细胞重悬，滴加于带圈的玻璃片上，自然干燥，冷丙酮固定10min.
C1.3 间接免疫荧光法
C1.3.1 用10％新鲜羊或牛血清封闭标本片，置湿盒中于37℃30min。
C1.3.2 分别加入适当稀释度的抗甲型和乙型流感型特异性单克隆抗体，置湿盒中于37℃放置1h.在PBS中洗两次，共10min。
C1.3.3 加适当稀释度的兔抗鼠荧光素结合物置37℃1h.在PBS中洗三次，共10min，末次用蒸馏水过一下。
C1.3.4 于荧光显微镜下观察结果，观察到三个以上胞浆内或胞核内荧光阳性细胞即可判为阳性。
C2 标本经敏感细胞增殖1代后查抗原
C2.1 原理
病人呼吸道标本经接种敏感细胞（狗肾传代细胞MDCK）增殖1～3d后，将细胞消化分散制成抗原片，再用免疫荧光法或免疫酶染法检查细胞内抗原。由于标本中的病毒在敏感细胞增殖后查抗原，能明显提高其诊断的敏感性，可在细胞病变出现以前查到抗原，可以直接定型，而且比常规鸡胚分离病毒法要快得多，一般24～72h即可诊断。检查方法可采用间接免疫酶染法（C2.5）或间接免疫荧光法（C2.4）。
C2.2 标本的收集及处理儿童标本可采用咽拭子，最好采用负压抽吸法；成人标本可采用咽漱液，最好采用鼻咽洗液。标本按附录A（标准的附录）中A2.3方法处理。
C2.3 标本的接种培养及制片取处理过的标本液0.2mL接种于长成单层的MDCK细胞，每份标本接种3管，置37℃吸附1～2h后弃去标本液，加入每毫升含2μg胰酶的199维持液至1mL，于35℃培养24、48和72h分别取出1管，收集上清备用，将细胞用消化液（1份0.25％胰酶＋4份Versene）消化下来，用PBS洗一次，然后滴加于带圈的玻璃片上，自然干燥，冷丙酮固定。同法制备未经感染的正常MDCK细胞片即为正常对照细胞。
C2.4 间接免疫荧光法
C2.4.1 加单克隆抗体同C1.3.2。
C2.4.2 加兔抗鼠荧光素结合物同C1.3.3。
C2.4.3 于荧光显微镜下观察结果，观察到胞浆内或胞核内荧光，而正常细胞片未见荧光，即可判定为阳性。
C2.5 间接免疫酶染法
C2.5.1 加单克隆抗体同C1.3.2。
C2.5.2 加适当稀释度的羊抗鼠酶标结合物，湿盒中置37℃1h，用PBS洗两次10min。
C2.5.3 加邻苯二胺底物液，其配制方法为：4mg邻苯二胺＋10mLpH5.0磷酸－柠檬酸缓冲液＋15μL双氧水。pH5.0磷酸缓冲液的配制方法为：先分别配制0.1mol/L柠檬酸（C6H8O7·H2O）（21g/1000mL）和0.1mol/L磷酸氢二钠（Na2HPO4）（28.4g/1000mL），分别按24.3mL和25.7mL混合后，再加入等量（50mL）双蒸水混合即为pH5.0磷酸盐－柠檬酸缓冲液。加入底物液3～5min即可观察结果。
C2.5.4 于倒置显微镜下观察结果（观察结果时，细胞要湿，如果细胞已干，可以加入一滴自来水），观察到棕红色深染细胞，根据观察到的深染细胞多少记录为＋＋＋＋、＋＋＋、＋＋、＋、±、－。以观察到＋以上深染细胞判为阳性；有时可观察到单个深染细胞被无色或淡红色细胞所包围，而正常细胞对照呈无色或淡红色，亦可判为阳性。
