鼠疫细菌学检查方法
B1 镜检
B1.1 涂片：按附录A取材，剪取腺、肝、脾、肺、心，用切面在洁净玻片上压印或涂成薄片；或取骨髓、脑脊液及各种渗出液、痰等用接种环直接涂片。用95％乙醇或乙醇、乙醚各半配制的固定液固定10min，取出自然干燥。
B1.2 染色：涂片必须进行革兰氏染色。如一份材料有多张涂片时，可行美兰染色或魏申氏及姬姆萨染色。
B1.3 镜检：如发现革兰氏阴性两极浓染两端钝圆的短小球杆菌，说明符合鼠疫菌的特点，还要注意腐败材料或陈旧材料菌体多形态的变化。
B2 培养
B2.1 培养基：应使用新鲜的选择敏感培养基，常用龙胆紫溶血胰酶消化液琼脂；一般材料分离鼠疫菌 龙胆紫应含0.5×10－5。污染材料龙胆紫应含1×10－5。增菌培养可用龙胆紫溶血胰酶消化汤等。培养基的pH要求6.9～7.1。
B2.2 接种方法：动物材料按附录A取材，然后用接种环在脏器切面中心钩取被检材料接种在平碟上，若材料新鲜也可用脏器切面直接压印后再划线接种骨髓材料在断端用注射器抽取骨髓或用生理盐水注入冲洗，吸取冲洗液一滴到平碟上再划线接种；液状材料可用接种环直接钩取划线培养。蚤类材料可按附录A方法处理后集组乳磨钩取乳磨物接种。集组培养时应一只动物的同一蚤种集一组，混合集组时，必须做到同地点、同鼠种、同蚤种方为一组。蚤类材料较少时应采取单匹拉胃接种培养。其他昆虫可参照蚤类进行。自死鼠或重点材料必要时可用液体培养基先增菌再分离。各种材料应接种两个平碟；个用作分离鼠疫菌，另一个做噬菌体快速诊断。
B2.3 培养：已接种的培养基应置28～30℃温箱中培养。动物材料一般培养3天，昆虫材料培养4天。
B2.4 观察：培养物每天观察一次，动物材料连续观察3天。昆虫材料连续观察4天。观察中发现疑似菌应即时进行纯分并同时进行噬菌体试验。
B3 噬菌体试验
B3.1 常规方法：凡发现疑似鼠疫菌应钩菌划线接种于溶血琼脂平碟上，用注射器或毛细吸管吸取鼠疫噬菌体一滴在平碟划线上部使其垂直流下，然后置28℃培养24h观察结果，如出现噬菌斑或噬菌带即可判为鼠疫噬菌体试验阳性。
B3.2 噬菌体快速诊断：凡要做噬菌体快速诊断的材料，被检材料要接种两个平碟，其一作分离鼠疫菌用，另一接种后即时滴人鼠疫噬菌体做噬菌体试验。
B4 动物试验
B4.1 接种材料的制备
取被检脏器在灭菌乳钵中研磨，按每100mg脏器加入1mL生理盐水制成悬液；昆虫材料可按同地点、同宿主、同虫种10～30匹为一组，用1×10-5的龙胆紫生理盐水洗净后在乳钵中研磨，每组昆虫加入生理盐水1～2mL制成悬液；骨髓可用生理盐水稀释2～3倍；渗出液、血液等可以直接使用，血液不能在现场接种的应加入抗凝血物质。吸取接种液体前，凡是悬液状的可在悬液中加入一个灭菌小棉球，然后将注射器针头插入棉球内吸取被检材料接种动物。
B4.2 接种方法及接种剂量
B4.2.1 腹腔接种：适用于要迅速获得结果，而又不期待较明显的病理变化者。般用于新鲜被检材料，方法是先剪去准备注射一侧的腹毛，用碘酒、酒精消毒，待干后，将试验动物头部放低，尾部提高，提取腹壁缓慢刺入，针头刺入后要沿腹壁进针，严防刺破内脏，缓缓注入被检物。豚鼠注入0.5～1.0mL，小白鼠注入0.2～0.4mL，然后取出注射器，用干棉球在针眼处轻轻压一下。
B4.2.2 皮下接种：为最常用的方法。病程适宜；致病后动物能出现较典型的病变；检出率较高。新鲜材料或轻微污染的材料均可使用本法。接种方法与腹腔接种类似，只是进针只到皮下；也可采取由大腿内侧进针到皮下，注射到大腿上部。接种剂量与腹腔接种一致。
B4.2.3 经皮接种：适用于腐败或污染严重的被检材料，病程慢，能得到明显的病理变化，且一般不会因其他混合感染而致死动物，能起到较好的生物过滤作用。但如被检材料中鼠疫菌含量少或毒力弱时，就不一定能感染上而造成遗漏。方法是将豚鼠下腹部剃去或剪去4cm2的毛；小白鼠腹部剃去或剪去1～2cm2的毛，用锐器划伤皮肤使至不出血为当。用棉签浸上被检材料在裸露皮肤上涂布并揉擦，使其经皮感染。
B4.3 饲养观察
接种后的动物应置人安全易观察的容器中，在鼠疫强毒系统的实验动物室内饲养观察。一般多在1～3天发病，发病时动物萎糜，不摄食，竖毛、弓背，死亡多在3～7天。动物死后应即时解剖观察病变，分离鼠疫菌。如动物到第7天仍不发病，第8天可取出杀死解剖检查。
被检材料经以上“四步诊断”检查符合鼠疫菌的特点，现场即可判定为动物鼠疫，按规定逐级上报，进行疫区处理，并将菌株送上级业务部门复判，作进一步检查。
