病原学诊断方法（补充件）

　　A1 病毒分离

　　从病人呼吸道或血液采集标本分离病原体。

　　A1.1 标本收集

　　宜在皮疹出现前，柯氏斑出现时采集标本。将灭菌棉棒稍蘸液体（2％牛血清Eagle液），反复涂抹患者咽部数次，然后将棉棒浸于上述标本液（1～1.5mL）中反复挤压，标本液中加入10倍常规用量的青、链霉毒（各1000u/mL）及制霉菌素50μg/mL.加肝素抗凝的血液白细胞中也可分离病毒。

　　A1.2 接种

　　取0.1～0.2mL标本液接种于生长在试管中的单层原代人胚肾细胞（或其他原代细胞如人羊膜、人胚肺、猴肾等或人二倍体细胞或传代细胞如B95a细胞）上，37℃1h后弃液，再加入含双倍常规抗生素量的细胞维持液1mL，37℃培养。并设未接种标本的空白对照培养。

　　A1.3 观察细胞病变

　　一般7天左右出现融合巨细胞病变，待细胞病变占全部细胞75％以上时（＋＋＋），冰冻融化三次，低速沉淀后取上清液留作毒种。若未见病变需连续盲传三代，每次培养观察二周，如仍不出现病变则为阴性。

　　A1.4 毒株鉴定

　　用已知麻疹病毒免疫血清观察能否与新毒株起作用，传统采用中和试验法。

　　A2 病毒核酸检测利用分子杂交技术或多聚酶联试验（PCR）技术测定病毒核酸。