附录B

　　梅毒血清学检查（补充件）

　　B1 非梅毒螺旋体抗原试验

　　目前常用性病研究实验室试验（Venereal　Disease Research Laboratoty Test简称VDRL）及快速血浆反应素环状卡片试验（Rapid Plasma Reagin Circle Card Test简称RPR）。

　　原理：所用抗原是心磷脂、卵磷脂和胆固醇的乙醇溶液。梅毒螺旋体破坏人体组织过程中，在体内释放出一种抗原性心磷脂，能刺激机体产生反应素，该反应素与从牛心中提取的心磷脂在体外可发生抗原抗体反应。卵磷脂的作用是加强心磷脂的抗原性，胆固醇可增强抗原的敏感性。心磷脂与卵磷脂遇水形成胶体溶液，胆固醇遇水析出结晶，反应时结晶成为载体（核心），在载体或核心的周围，包裹了一层心磷脂和卵磷脂，形成一种胶体微粒，这种微粒遇到梅毒血清抗体（IgG、IgM），即粘附在胶体微粒的周围，形成疏水性薄膜，由于摇动、碰撞，使颗粒与颗粒互相粘附而形成肉眼可见的颗粒凝集和沉淀，即为阳性反应；如遇到非梅毒血清，因体液中的白蛋白多于球蛋白，而白蛋白对胶体颗粒有保护作用，形成亲水性薄膜，即使同样摇动、碰撞，由于抗原颗粒周围没有粘附免疫球蛋白的作用，不能形成较大颗粒，无肉眼可见的凝集和沉淀，因此为阴性反应。

　　B1.1 VDRL玻片试验

　　B1.1.1 VDRL玻片定性试验

　　B1.1.1.1 待查血清56℃水浴中灭活0.5h，吸取50μL血清加在玻片圆圈中。

　　B1.1.1.2 用1mL注射器装上针头吸取抗原悬液滴加1滴。

　　B1.1.1.3 用手或机械转动器（每分钟180次）摇动玻片4min.

　　B1.1.1.4 立即按以下标准判断结果：

　　（2＋～3＋）肉眼可观察到大或中等块状凝集物，为阳性。

　　（1＋）肉眼可观察到小块状物，液体混浊，需用100倍显微镜观察，为弱阳性。

　　（-）在镜下仅见微小抗原颗粒，无凝集物，为阴性。

　　B1.1.2 VDRL玻片定量试验

　　为观察疗效，应作定量试验：为排除"前带现象"亦应用玻片定量试验。

　　待测血清用等渗盐水在试管中作6个稀释度：原血清、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16、1∶32，再按定性试验方法进行测定和判断结果。

　　B1.2 RPR 试验

　　优点：RPR抗原中加入活性炭颗粒，试验在特制的白色纸卡上进行，在白色底板上出现黑色凝集颗粒或絮片为阳性反应。该试验结果容易判断，肉眼即可观察，血清不须灭活，也可用血浆进行检测。

　　B1.2.1 RPR定性试验

　　B1.2.1.1 在卡片圆圈中加入50μL待检血清，并扩大到整个圆圈。

　　B1.2.1.2 用滴管和专用针头，加1滴RPR抗原悬液。

　　B1.2.1.3 用手或机械转动器（每分钟100次）转动卡片8min.

　　B1.2.1.4 立即按以下标准判断结果：

　　阳性反应：在圆圈中可见不规则大小黑色凝集块。

　　阴性反应：在圆圈中无黑色凝集块，仅见均匀的不凝集现象（呈亮灰色）。

　　该试验仅报告"阳性"或"阴性"，任何程度的阳性反应都需作定量试验。

　　B1.2.2 RPR定量试验

　　B1.2.2.1 待测血清用等渗盐水在卡片上作5个稀释度：原血清、1∶2、1∶4、1∶8、1∶16.

　　B1.2.2.2 按定性试验步骤操作，以出现阳性反应的最高稀释度报告结果。

　　非梅毒螺旋体抗原试验，由于其敏感性较高，尚可在某些传染病及胶原病时出现假阳性反应，因之对阳性反应要结合临床进行鉴别。

　　本试验适用于一期梅毒（阳性率75％～85％）及二期梅毒（阳性率100％）诊断。也适用于疗效观察，判定复发及再感染的监测，由于操作简便，出结果快，亦适用于普查、婚检、产前检查及其他健康检查等。

　　B2 梅毒螺旋体抗原试验

　　因抗原是梅毒螺旋体，检测血清中抗梅毒螺旋体抗体，其敏感性和特异性均较高，现常用荧光螺旋体抗体吸收试验（Fluorescent　Treponema Antibody－Absorption Test，简称FTA－ABS）及梅毒螺旋体血球凝集试验（Treponema Pallidum Hemagglutination Assay，简称TPHA）。

　　B2.1 FTA－ABS试验

　　B2.1.1 试验步骤

　　B2.1.1.1 将Nichol株梅毒螺旋体涂于载玻片上，丙酮固定。

　　B2.1.1.2 滴加经吸收剂处理的待检血清，室温孵育30min，使之与梅毒螺旋体发生抗原抗体反应，PBS冲洗（吸收剂由非致病性Reiter株螺旋体培养液制成，可以除去待检血清中的非特异性抗体）。

　　B2.1.1.3 载片的抗原抗体复合物上滴加荧光素标记的兔（或羊）抗人IgG，再室温孵育30min，PBS冲洗，甘油封片。

　　B2.1.1.4 荧光显微镜观察，如涂膜上梅毒螺旋体呈亮绿色，示阳性反应。无亮绿荧光着色，示阴性反应。

　　B2.2 TPHA试验

　　TPHA试剂盒含有：

　　a. 再化液（蒸馏水）；

　　b. 吸收稀释液；

　　c. 致敏血球（冻干）；

　　d. 未致敏血球（冻干）；

　　e. 阳性对照血清（冻干）；

　　f. 每滴为25μL校正过的滴管。

　　其他材料：U型微量血凝反应板（96孔）。

　　B2.2.1 TPHA定性试验步骤

　　B2.2.1.1 待检血清用吸收稀释液稀释成1∶20，2孔，室温孵育30min.

　　B2.2.1.2 于此2个孔分别加75μL未致敏血球及致敏血球。

　　B2.2.1.3 振荡，室温孵育2h，肉眼观察结果。

　　a. 阳性反应：红细胞光滑地覆盖整个孔底或其周围以红细胞环，为血凝现象。

　　b. 阴性反应：红细胞紧密地沉于孔底中央或无孔的钮扣状，为无血凝现象。

　　c. 可疑反应：孔底中央形成小的圆孔洞。

　　本实验应设阳性对照，阴性对照、试剂对照三组。

　　B2.2.2 TPHA定量试验步骤

　　B2.2.2.1 所有阳性血清都应作定量试验以确定其终点滴度。

　　B2.2.2.2 按定性试验步骤，将阳性血清作倍比稀释，滴度从1∶80～1∶5 120.

　　B2.2.2.3 结果：以出现强阳性或弱阳性反应的最高稀释度出报告。

　　梅毒螺旋体抗原试验，由于特异性及敏感性均高，适用于二期梅毒（阳性率100％），三期及晚期潜伏梅毒（阳性率95％～98％）以及作为证实试验等。