鼠疫细菌检验程序及结果判定

　　B1 鼠疫细菌检验基本要求

　　B1.1 鼠疫细菌检验必须在专用实验室内进行。

　　B1.2 检验人员必须事前熟悉实验室管理制度，自身防护制度，技术操作规程等。

　　B1.3 凡进入毒菌室操作，必须两人以上同时工作。

　　B1.4 及时准确做好检验的各项实验记录。

　　B2 反向血凝试验

　　B2.1 对于来自疑似鼠疫病人和疑似鼠疫尸体的检材，只要标本量允许，均应进行反向血凝试验的检查，以便做出早期诊断。

　　B2.2 反向血凝试验的操作步骤与结果判定见附录C.

　　B2.3 如出现反向血凝滴度达到或超过1∶100的阳性结果，负责检验的单位应在收到检材后24h内做出疑似鼠疫报告。

　　B2.4 反向血凝试验标本及所用过的各种器材，应视为污染物品，须经5％来苏儿浸泡24h后再行洗涤处理。

　　B3 细菌培养

　　B3.1 新鲜材料可直接涂布溶血（0.1％）赫氏琼脂平板，按三段法划线。

　　B3.2 腐败材料可划线于龙胆紫（1∶10万～1∶20万）亚硫酸钠（0.025％）平板或龙胆紫溶血平板。

　　B3.3 液体材料及骨髓，用灭菌白金耳取标本划线。脏器材料先在平板表面压印，再以白金耳划线，棉拭子可直接涂布于培养基表面。

　　B3.4 同一病人或尸体的不同材料可以分格涂于同一平板表面。每份材料接种一式两个平板，一个作分离培养，另一个准备做鼠疫噬菌体裂解试验。

　　B3.5 置28℃温箱培养，于14～96h内每日观察以发现具有鼠疫菌典型形态的菌落。没有严重污染的平板，必须持续培养7d，无疑似鼠疫菌落出现时，始可弃去。

　　B4 鼠疫噬菌体裂解试验

　　B4.1 在B3.4中用于噬菌体裂解试验的平板上，于划线一侧滴噬菌体一滴，倾斜平板使其垂直流过划线。

　　B4.2 分离培养中发现可疑鼠疫菌落时，用白金耳取可疑菌落重新划线于血琼脂平板，再依上法滴加鼠疫噬菌体。

　　B4.3 置28℃温箱，24h观察有无噬菌现象，噬菌带宽于噬菌体流过的痕迹时，方可判定为鼠疫噬菌体试验阳性。

　　B5 动物接种

　　B5.1 病人、尸体材料，特别是腐败材料必须在进行细菌培养的同时接种小白鼠（18～20g）或豚鼠（250～300g）。

　　B5.2 脏器块，置于消毒乳钵内，用灭菌剪刀剪碎并研成匀浆，加入适量生理盐水，制成悬液备用。

　　B5.3 新鲜材料可用腹腔或皮下接种，豚鼠接种0.5～1.0mL，小白鼠接种0.2～0.4mL。

　　B5.4 腐败材料可采用经皮接种，剃去动物腹毛，并造成轻微划痕，将材料以棉拭子涂布于剃毛之皮肤上并擦之，涂擦时应以平皿盖掩盖，以防材料四溅。

　　B5.5 接种实验动物后，做好标记，放入饲养笼内，挂牌记载编号、接种日期、途径等。每日饲养1～2次，直至动物死亡或经7d后杀死剖检。

　　B5.6 动物死亡后，按B3和B4进行检验。

　　B5.7 如7d动物没有死亡，应处死动物，取动物的脾脏及有可疑病变组织制成匀浆，接种第2组动物，动物死亡或观察7d后处死，按B5.6检验，同时采集血清，做被动血凝试验。无阳性发现方可做出阴性报告。

　　B6 鼠疫菌判定依据

　　B6.1 分离获得鼠疫菌落，并按B4.3的标准判定鼠疫噬菌体裂解试验阳性时，始可做出鼠疫细菌学判定。负责检验的单位应在噬菌体裂解试验结果产生后24h内将鼠疫菌鉴定报告报送负责部门。并对过去所做的疑似鼠疫报告做出认定或订正报告。

　　B6.2 实验动物死亡，由死亡的实验动物体内重新分离到鼠疫菌，并经噬菌体裂解试验证实，负责检验的单位应做出鼠疫强毒菌的鉴定报告。