胶乳凝集试验

　　C1 目的

　　应用胶乳凝集试验测定病人CSF、急性期血清和尿中Nm群特异抗原，辅助流脑临床诊断。

　　C2 材料

　　C2.1 10％胶乳颗粒（Latex Partic1es，Lx）悬液，颗粒直径为0.81μm。

　　C2.2 从兔免疫血清中提纯的抗A、B和C群Nm的IgG。

　　C2.3 在洁净玻璃板上，用红漆画两排红圈，其直径为3.5cm左右，漆干后备用。

　　C2.4 pH8.2，0.1mol/L硼酸盐缓冲液。

　　C2.5 BSA。

　　C2.6 白明胶。

　　C2.7 戊二醛。

　　C2.8 叠氮钠。

　　C2.9 怀疑流脑病人的CSF或急性期血清或尿液。

　　C3 试验方法

　　C3.1 兔抗不同群Nm的IgG致敏Lx。

　　C3.1.1 将10％Lx悬液用硼酸缓冲液再稀释80倍。

　　C3.1.2 取稀释的Lx悬液1个体积分别加等体积合适浓度的兔抗不同群Nm的IgG，置25mL容量的三角瓶中。

　　C3.1.3 在37℃水浴中旋转（120r/min）振荡瓶中的反应物，致敏Lx2h.必要时可在每毫升Lx中加25％戊二醛10～20μL，这将有助于Lx吸附IgG。

　　C3.1.4 离心致敏过的Lx（3000r/min，30min），用1mL吸管小心吸取上清液，计量后弃之；再加含有0.1％BSA的硼酸盐缓冲液（Borate－Buffered Solution Containing BSA，BBSB），混悬Lx，同上离心，弃上清，除去游离的IgG；照此重复洗涤Lx3次。

　　C3.1.5 用BBSB液再将Lx恢复到致敏时的浓度，加叠氮钠至终浓度为0.1％，置4℃备用3～6个月。

　　C3.1.6 用正常兔IgG同上步骤致敏Ix作为阴性对照。

　　C3.2 以胶乳凝集试验检测疑似流脑病人标本内Nm群特异性抗原。

　　C3.2.1 病人标本的处理：CSF离心（3000r/min，30min），取上清，沉淀部分作细菌培养；急性期血液（2mL），分离血清，置56℃将其灭活30min；急性期尿液5mL加20mL无水乙醇，置4℃1～2h，离心（3000r/min，15min），弃上清，收集沉淀部分加0.25mL BBSB液将其溶解，同前离心，小心地吸取上清液待测，不要吸取尿中不溶解的沉渣。

　　C3.2.2 用BBSB液将处理过的标本从1：2起连续倍比稀释成不同的稀释度。

　　C3.2.3 用9号针头分别吸取各稀释度标本2滴滴到玻璃板上的红圈内，其中1滴滴到上列一排的红圈内，作为试验组；另1滴滴到下列一排的红圈内，作为平行对照组。

　　C3.2.4 往试验组的红圈内各加1滴免疫的兔IgG致敏过的Lx悬液；往对照组的红圈内各加1滴正常兔IgG所致敏的Lx悬液。

　　C3.2.5 轻轻地旋摇玻板，使标本与Lx充分混匀。

　　C3.2.6 在1～2min内即可见凝集，5min时凝集更明显，此时可记录试验结果。

　　C3.2.7 若只在试验组的红圈内出现明显凝集，但Lx本身与BBSB液以及在平行对照组的红圈内皆不出现凝集则判断为阳性反应。此时与阴性对照组比较，Lx悬液变得较清亮，Lx明显地聚集成较大的颗粒。

　　C3.2.8 在上述病人标本中只要有一种标本与抗任何一群Nm的IgG所致敏的Lx发生明显凝集反应，则说明所检标本中含有Nm相应群特异的抗原，即可辅助临床诊断为流脑。