静脉色氨酸耐量试验
F.1 原理
空腹抽血并在静脉注射色氨酸45min后,测定游离色氨酸和总色氨酸含量。
F.2 仪器
F.2.1 荧光分光光度计。
F.2.2 手提式高压消毒锅。
F.2.3 超滤器(直径25mm针筒式)。
F.2.4 超滤膜(型号C×A-50、分子量截留值5万)。
F.3 试剂
F.3.1 1%静脉注射用色氨酸。
F.3.2 0.6mol/L三氯乙酸(TCA)。
F.3.3 2%甲醛。
F.3.4 6mmol/L 三氯化铁(FeCl3)0.6mol/L TCA液。称取FeCl3(MW=277.032)162mg溶于l00ml 0.6mol/L TCA溶液中。
F.3.5 色氨酸标准液
a)1mmol/L贮存液;
b)0.1mmol/L色氨酸标准应用液。
F.4 操作方法
F.4.1 空腹l2h,静脉抽血3m1,按体重4mg/kg注射色氨酸,45min后换臂抽血3m1,测定两次血清的色氨酸含量。
F.4.2 制备超滤液(测游离色氨酸用):在超滤器装入已处理过的超滤膜,注意正面向上,旋紧滤器,加入血清0.5ml,将滤器安装在口径大小相宜的塑料管上,放入离心机3500-4000r/min离心20min,取得超滤液。
F.4.3 血清上清液制备(总色氨酸用):取血清加等量0.6mol/LTCA混合沉淀蛋白,离心后取上清液用。
F.4.4 荧光物质生成:取10ml刻度试管4个,按下标明加液:
以上各管加盖细菌培养基用塑料试管塞,在高压消毒锅以高压加热2Omin,生成荧光物质。加热完毕冷却,补足蒸馏水至刻度4ml,在荧光分光光度计以发射光波448nm、激发光波302nm测定色氨酸含量。
F.5 计算
F.6 正常参考值
游离色氨酸 3~7μmol/L
总色氨酸 30~85μmol/L