血中吲哚氰绿(IGG)滞留率测定法
E.1 原理
静脉注射吲哚氰绿l5min后采血,分离血清或血浆,测定吲哚氰绿浓度,求出平均滞留率(R)。
各种肝病时,由于肝脏摄取和排泄机能的异常,吲哚氰绿滞留率高于正常值。
E.2 仪器
紫外可见分光光度计。
E.3 试剂
吲哚氰绿注射液。
E.4 操作步骤
E.4.1 吲哚氰绿以注射用蒸馏水稀释成5mg/ml.
E.4.2 吲哚氰绿注射剂量为0.5mg/kg体重。
E.4.3 在病人肘部常规消毒后,先抽取静脉血5ml(或用肝素抗凝)作为空白对照管,而后在30s内注入吲哚氰绿,并开始计时。
E.4.4 15min时在病人另一肘部抽取静脉血5ml(或用肝素抗凝),作为待测血清(或血浆)。
E.4.5 抽取的静脉血分离出血清或血浆。
E.4.6 取1ml待测血清(或血浆),加入2ml0.9%氯化钠混匀,在805nm波长下,以空白管(1ml注射吲哚氰绿前的血清或血浆,加2ml0.9%氯化钠混匀)校正光密度至"0"点,读取测定管光密度读数,查阅标准曲线,求得l5min时血清(或血浆)吲哚氰绿的含量,按式(D1)计算出平均滞留率(R):
……(D.1)
注:假设注射0时的血清(或血浆)吲哚氰绿浓度为1mg/dl
E.5 标准曲线的绘制
吲哚氰绿25mg,加蒸馏水稀释至250ml,成为吲哚氰绿标准贮存液。按表E1配制标准液浓度:
取标准液1ml,加1ml0.9%氯化钠,再加入1ml正常人血清(或血浆)混匀,在805nm波长下,用分光光度计测定,比色皿1cm,以空白管(1ml正常人血清或血浆加入1ml0.9%氯化钠,再加入1ml蒸馏水混匀)校正密度至"0"点,读取各标准液光密度读数,以光密度读数为纵坐标,标准浓度为横坐标,绘成标准曲线。
E.6 正常参考值
l5min后平均滞留率10%以下。