抗原特异性IgE测定—酶联免疫吸附试验（ELIST）

　　D.1  原理

　　将变应原结合到固相载体—凹孔聚苯乙烯板上，加入待检血清，使之发生抗原抗体的特异结合，再加入辣根过氧化物酶标记的第二抗体（马抗人IgE），便成抗原一抗体一抗抗体的复合物，经底物显色后，通过酶标免疫检测仪测定其OD值，可知血清中特异性抗体的含量。

　　D.2  器材

　　凹孔聚苯乙烯板、微量加液器、酶标免疫检测仪、PH试纸、恒温箱、冰箱、洗瓶、湿盒、常用玻璃仪器等。

　　D.3  试剂

　　a）人血清白蛋白（HSA）（0.05％）；

　　b）变应原；

　　c）0.02mol／L（PH7.4）磷酸盐缓冲液（PBS）；

　　d）吐温—20（Tween—20）（每100mlPBS液中加0.05ml，制成PBS—T）；

　　e）牛血清白蛋白（BSA）或小牛血清（10％）；

　　f）0.05mol／L（PH9.6）碳酸盐缓冲液；

　　g）PH5.0磷酸盐一柠檬酸缓冲液；

　　h）邻苯二胺（OPD）；

　　i）30％过氧化氢；

　　j）辣根过氧化物酶标记的马抗人IgE；

　　k）2mol／L硫酸。

　　D.4  方法

　　D.4.1  包被HSA，37℃，2L。

　　D.4.2  PBS-T洗3次。

　　D.4.3  加变应原4℃过夜。

　　D.4.4  PBS-T洗3次。

　　D.4.5  加入待检血清（稀释液为PBS-T，含1％BSA，1：5稀释）37℃，90min。

　　D.4.6  PBS-T洗6次。

　　D.4.7  加入酶标抗体，37℃，90min。

　　D.4.8  PBS0-T洗8次。

　　D.4.9  加入底物液0.02％OPD，含luL／10ml过氧化氢，37℃，30min。

　　D.4.10  2mol／L硫酸终止反应。

　　D.4.11  用酶联免疫监测仪测定OD值，波长为492nm。

　　D.4.12  结果判定：大于正常均值2SD为阳性。