全血、红细胞、血浆胆碱酯酶活性测定法
B.1 原理乙酰硫代胆碱在胆碱酯酶作用下，水解为硫代胆碱和乙酸盐。硫代胆碱与二硫双一硝基苯甲酸反应呈黄色化合物后进行比色定量。水解产生的硫代胆碱量反映胆碱酯酶活性值。
B.2 仪器a.恒温水箱（37士0.5℃）；b.离心机；c.分光光度计。
B.3 试剂a.硫代乙酰碘代胆碱溶液（基质）；称取硫代乙酰碘代胆碱75mg，溶解于双蒸水中，稀释至l0ml，置冰箱（4℃）保存。临用前用双蒸水稀释10倍；b.二硫双一硝基苯甲酸溶液（显色剂）：称取二硫双一硝基苯甲酸100mg，溶解于50ml生理盐水后，再加入1/l5mol磷酸缓冲液（pH8.0）50ml溶液中。置冰箱保存。临用前用等体积的生理盐水和1/15mol磷酸缓冲液稀释10倍；c.水杨酸毒扁豆碱（抑制剂）：称取水杨酸毒扁豆碱10mg，用双蒸水溶解并稀释至10ml。冰箱保存。
B.4 操作步骤B.4.1 取耳（或指）血10μl加入盛有二硫双一硝基苯甲酸溶液10ml的离心管中，轻轻混匀。
B.4.2 取出4.0ml于试管A中，作为全血胆碱酯酶活性测定管。剩余溶液以3000r/min的转速离心5min，移取上清液4.0ml于试管B中，作为血浆胆碱酯酶活性测定管。另取二硫双一硝基苯甲酸溶液4.0ml加入试管C中作为空白管。
B.4.3 A、B、C管各加硫代乙酚碘代胆碱1.0ml，混匀，记时。
B.4.4 在37℃恒温水浴中准确保温6min后，上述各管分别加入水杨酸毒扁豆碱溶液2滴，迅速混匀。
B.4.5 A管以3000r/min转速离心5min，使血细胞沉淀。
B.4.6 A管上清液、B管分别用1cm比色杯，在420nm波长测定其吸光度，以空白管调零点。
B.5 计算将测得A、B管的吸光度代入式（A1），计算出全血和血浆胆碱酯酶活性，两者之差即为红细胞胆碱醋酶活性值。
……A1
式中：1.36×104 酶分析中形成的硝基苯甲酸离子的吸光系数。硝基苯甲酸离子数与产生的硫代胆碱相同。
胆碱酯酶活性测定结果按每毫升全血（血浆或红细胞）每分钟产生1μm硫代胆碱为1单位。
B.6 注意事项：a.采血前必须注意清洗皮肤表面，防止污染，并用经肝素处理过的血红蛋白管准确吸取10μl；b.基质和样品均需预温，以确保反应温度。预温时间取决于测定时室温，一般2～5min；c.每个样品的保温时间需严格控制在6min，即从加入基质到终止酶反应时间各管必需一致。
