1、细胞DNA含量分布（由细胞DNA降解方式检测细胞凋亡）

　　*收集已固定的单细胞悬液约5×10⁵~1×10⁶/ml；

　　*离心除去固定液，3mlPBS重悬细胞；

　　*1500rpm离心，5分钟，弃去PBS；

　　*加PI染液1ml，室温避光20分钟；

　　*调整细胞浓度5×105/ml；

　　*上机检测。

　　2、磷脂酰丝氨酸外翻分析检测细胞凋亡

　　1）常规制备单细胞悬液，用PBS洗两次。（若为全血要先溶血），取约5×106个细胞，1500rpm离心，弃上清，用400μl1×BindingBuffer重悬；

　　2）分成a、b、c、d、e五管，每管约1×106个细胞

　　a）阴性对照，不加任何试剂；

　　b）阳性对照，加2%多聚甲醛固定30分钟，加AnnexinV5μl，室温10min，用1×BindingBuffer洗一次，弃上清再加190μl缓冲液、10μlPI避光15分钟

　　c）加10μlPI，避光孵育15分钟；

　　d）加5μlAnnexinV液，室温避光孵育15min；

　　e）加10μlPI和5μlAnnexinV液，室温避光孵育5min；

　　3）每管各加400μl1×BindingBuffer.

　　4）上机检测。

　　注意a.操作动作要尽量轻柔，勿用力吹打细胞；

　　b.操作时注意避光；

　　c.反应完毕后尽快检测，最好在一小时内检测。

　　3、用单克隆抗体APO2.7检测细胞凋亡

　　1）放置0.5~1×10⁶个细胞到试管中；

　　2）室温离心200g，6min；

　　3）弃上清，加入100μl冷的（4℃）在PBSF溶液中含100μg/ml的digitonnin，轻轻地重悬细胞，在冰上孵育20min；

　　4）加入2ml冷的（4℃）PBSF液，室温离心200g，6min；

　　5）弃上清，加入20μlPE标记的Apo2.7单克隆抗体和80μlPBSF液，用vortex轻轻震荡，室温避光孵育15分钟；

　　6）加入2mlPBSF液，室温离心200g，6min；

　　7）弃上清，加入1mlPBSF液重悬细胞；

　　8）避光保存，直到流式细胞仪检测。

　　PBSF：含2.5%FCS（v/v）和0.01%NaN3（w/v）的PBS。（医学教育网搜集）