1、培养细胞的DNA含量的测定

　　制备单细胞悬液于200μl的PBS缓冲液中；

　　加入2ml预冷的70%乙醇，4℃保存；

　　附：细胞固定的一般步骤

　　1）取单细胞悬液1～2×106个细胞于PBS（PH=7.2）缓冲液中；

　　2）300g离心5分钟，弃上清，反复两次；

　　3）重悬细胞于0.5mlPBS缓冲液中；

　　4）将细胞悬液放置于2～3ml冷70%乙醇中，混匀，保存于4℃，至少30分钟。在4℃条件下可保存2~3周。

　　注意：

　　*根据实验的要求，固定剂也可选用1～3%多聚甲醛；

　　*将乙醇作为固定剂时，乙醇应预冷至0～4℃；

　　*细胞在固定时，固定剂应缓慢滴入细胞悬液中，使固定剂的浓度缓慢增加，并不断震摇，以免细胞成团（特别是用乙醇固定时）。

　　*300g离心5分钟，去上清，再重悬于400μlPBS中；

　　*显微镜下观察，若有明显的黏附，须再用筛网过滤；

　　*加入PI（含Rnase），避光孵育30分钟；

　　*上机检测。

　　2、新鲜组织的DNA含量的测定

　　1）用200mg湿重组织用机械法制成单细胞悬液；

　　2）500g离心5分钟；

　　3）弃上清，重悬于10ml染色-去污剂中；

　　4）再过滤，用200目的筛网或70~80μm的筛网过滤；

　　5）上机检测。

　　3、石蜡包埋组织切片的DNA含量的测定

　　1）从石蜡包埋切取切片50μm厚，2~3片，制成单细胞悬液；

　　2）用PBS缓冲液洗涤，500g离心5分钟，弃上清；

　　3）加入PI液1ml室温避光30分钟；

　　4）调整细胞浓度为1×106/ml；

　　5）上机检测。（医学教育网搜集）