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常用的致突变试验方法——细菌回复突变试验-鼠伤寒沙门菌回变试验

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  原核生物体外试验、基因突变。

  鼠伤寒沙门菌试验菌株(突变型)不能自行合成组氨酸,在不含组氨酸的最低营养平皿上不能生长。突变型试验菌株可被各种诱变因素诱导,回复突变成野生型,即恢复了合成组氨酸的能力,可在此平皿上生长成可见菌落。

  鼠伤寒沙门菌野生型(原养型)←→组氨酸营养缺陷型突变株(his+)回复突变(his)

  如果受试物处理组回变菌落数显著超过阴性对照组;并有剂量反应关系,即可判定受试物为鼠伤寒沙门菌的致突变物。

  Ames试验中使用的标准菌株为TA97、TA98、TA100和TA102.his-突变外,附加突变:①深粗糙型突变(rfa)、②切除修复基因uvrB缺失(△uvrB)和③抗药因子(R因子即抗氨苄青霉素的PKMl01质粒和抗四环素的PAQ1质粒)。

  TA97和TA98主要用于检测移码型突变;TAl00和TAl02可检测碱基置换。

  有点试验和掺入试验两种。应分别进行不加及加代谢活化系统的试验,常用为S9混合液,即用多氯联苯诱导的大鼠肝匀浆经9000g离心得到的上清液,再加上NADP及葡萄糖-6-磷酸等辅助因子。

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