方法名称： 青霉素V钾片－青霉素V钾－高效液相色谱法

应用范围： 本方法采用高效液相色谱法测定青霉素V钾片中青霉素V钾的含量。

本方法适用于青霉素V钾片。

方法原理： 供试品经pH6.5磷酸盐缓冲液溶解并定量稀释，进入高效液相色谱仪进行色谱分离，用紫外吸收检测器，于波长268nm处检测青霉素V钾的峰面积，计算出其含量。

试剂： 1. 乙腈

2. 冰醋酸

3. pH6.5磷酸盐缓冲液

4. 氢氧化钠试液

仪器设备： 1. 仪器

1.1 高效液相色谱仪

1.2 色谱柱

十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，理论塔板数按青霉素V钾峰计算应不低于2000。

1.3 紫外吸收检测器

2. 色谱条件

2.1 流动相：水 乙腈 冰醋酸=65 35 1

2.2 检测波长：268nm

2.3 柱温：室温

试样制备： 1. pH6.5磷酸盐缓冲液

取0.2mol/L磷酸二氢钾溶液125mL，加水250mL，混匀，用氢氧化钠试液调节pH至6.5，再用水稀释至500mL。

2. 氢氧化钠试液

取氢氧化钠4.3g，加水使溶解成100mL。

3. 对照品溶液的制备

精密称取青霉素V钾对照品约50mg，置50mL量瓶中，用pH6.5磷酸盐缓冲液溶解并稀释至刻度，摇匀，即为对照品溶液。

4. 供试品溶液的制备

取供试品10片，精密称定，研细，精密称取适量（约相当于青霉素V钾50mg），置50mL量瓶中，用pH6.5磷酸盐缓冲液溶解并稀释至刻度，摇匀，取续滤液，即为供试品溶液。

注：“精密称取”系指称取重量应准确至所称取重量的千分之一。“精密量取”系指量取体积的准确度应符合国家标准中对该体积移液管的精度要求。

操作步骤： 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各20mL，注入高效液相色谱仪，用紫外吸收检测器于波长268nm处测定青霉素V钾（C16H18N2O5S）的峰面积，计算出其含量。每1mg的C16H18N2O5S相当于1695青霉素V单位。

参考文献： 中华人民共和国药典，国家药典委员会编，化学工业出版社，2005版，二部，p.311。