营养要求比一般细菌高，除基础营养物质外还需加入10～20%人或动物血清以提供支原体所需的胆固醇。最适pH7.8～8.0之间，低于7.0则死亡，但解脲脲原体最适pH6.0～6.5.大多数兼性厌氧，有些菌株在初分离时加入5%的CO2生长更好。生长缓慢，在琼脂含量较少的固体培养基上孵育2～3天出现典型的“荷包蛋样”菌落，向下长入培养基，周边为一层薄的透明颗粒区。医学教育`网搜集整理此外，支原体还能在鸡胚绒毛尿囊膜或培养细胞中生长。
繁殖方式多样，主要为二分裂繁殖，还有断裂、分枝、出芽等方式，同时，支原体分裂和其DNA复制不同步，可形成多核长丝体。
