这类抑制剂通常比较牢固的共价键与酶蛋白中的基团结合，而使酶失活，不能用透析、超滤等物理方法除去抑制剂来恢复酶活性
按照不可逆抑制作用的选择性不同，医学教`育网搜集整理又可分为专一性的不可逆抑制与非专一性的不可逆抑制两类。
1.非专一性不可逆抑制：抑制剂可与酶分子中的一类或几类基团反应，抑制酶的活性或使酶失活。一些重金属离子（铅、铜、汞）、有机砷化物及对氯汞苯甲酸等，医学教`育网搜集整理能与酶分子的巯基进行不可逆结合，许多以巯基为必需基团的酶，因此会被抑制，可用二巯丙醇（BAL）解毒：除去抑制作用。
2.专一性不可逆抑制剂：抑制剂仅仅和酶活性部位的有关基团反应从而抑制酶的活性。有机磷杀虫剂（敌百虫、敌敌畏等）能特异性地与酶活性中心上的羟基结合，使酶的活性受到抑制，而且有机磷杀虫剂的结构与底物愈接近，其抑制愈快。
