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衣原体感染

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  【概述】

  衣原体(chlamydial)是一群在光学显微镜下可以观察到的细胞内微生物,部分仅引起人类疾病,有些则可导致人与禽类动物共同感染。衣原体所引起的疾病近年来渐见增多,且有新种发现。

  【生物学特性】

  以往认为衣原体是病毒,但其后发现该病原与病毒不同之点为:①含有DNA及RNA两种核酸;②具有由粘肽组成的细胞壁;③有酶系统,可进行一定的代谢活动,合成蛋白;④按二分裂方式繁殖,有独特的生活周期;⑤含核糖体;⑥其生长可为部分抗生素所抑制。衣原体不能合成ATP,需由宿主细胞供给。

  衣原体与立克次体的区别为:①无需媒介物传播;②立克次体可主动钻入宿主细胞,而衣原体则以被动方式,通过宿主细胞吞饮入,并在吞噬细胞内存在;③衣原体感染细胞后,在其内形成特异性包涵体。

  衣原体与细菌的异同点见表11-20

表11-20 衣原体、病毒及细菌之比较

病毒 衣原体 细菌
大小(nm) 15~350 200~400 300~30000
形态 球形 多形性
专性细胞内寄生 + + -
核酸 DNA或RNA DNA+RNA DNA+RNA
细胞壁
繁殖 复制 周期性二分裂 二分裂
核糖体
代谢酶
包涵体形成 + + -
对抗菌药物 不敏感 敏感 敏感

  每个细胞繁殖周期约24~48小时,衣原体发育有两个阶段,细胞外期为原生小体(elementary body),在细胞内则演变为网状体(reticulate body)。前者的直径约0.3nm,中央有致密的类核结构,为具感染性的小颗粒。原生小体进入宿主细胞后,细胞表面膜即形成一个空泡,将其包围起来,约6~8小时后原生小体在细胞内逐渐增大而成网状体。后者直径约0.5~1nm,不具电子致密的核质体,通过二分裂方式增殖,使空泡内充满小颗粒,称"包涵体".小颗粒可从宿主细胞释出而再感染新的细胞。它可感染同一宿主的不同细胞,也可通过感染性渗出物感染他人,或以性交,使原生小体通过粘膜传入。

  【分型说明】

  衣原体含有共同的群抗原(即补体结合抗原),依其抗原性质、形态和胞质中所含糖原的不同,可将衣原体分为三类。

  1.沙眼衣原体(称I属或A亚型衣原体)形成的包涵体较坚硬,占据了宿主细胞核的位置,含致密的糖原;沙眼衣原体对磺胺嘧啶敏感。

  2.鹦鹉热衣原体(又称Ⅱ属或B亚型),对磺胺耐药,新形成的包涵体较大,裂解时,分布于细胞核周围,不含糖原。以上二型鉴定的方法除传统的糖原染色及包涵体的形态学外,近来还可用单克隆抗体来鉴别。

  3.肺炎衣原体,即TWAR因子。

  沙眼衣原体及鹦鹉热衣原体含同一脂多糖抗原,但二者仅含10%的同种的DNA,新种TWAR所含的DNA则与以上二个种无关,限制性内切酶也不同。

  依据多糖抗原不同,沙眼衣原体又可分为15个血清型,即A、B、Ba、C、D、E、F、、H、、J、K、L1、L2和L3;其中A、B、Ba、C则引起沙眼,L1、L2和L3则引起性病淋巴肉芽肿,而D、E、F、G、H、I、J和K则可导致包涵体结膜炎婴儿肺炎及非淋病性尿道炎(见表11-21)。鹦鹉热及肺炎衣原体,目前仅知各含一个血清型。

  衣原体对热较敏感,56℃5~10分钟即可使其灭活,常用消毒剂如0.1%甲醛、0.5%石炭酸1∶2000水及90%乙醇等均能杀灭衣原体。表11-21示不同衣原体所致疾病。

表11-21 衣原体所致病

疾 病 衣原体血清型
沙眼 A,B,Ba,C
包涵体结膜炎 D、E、F、G
婴儿肺炎 H、I、J、K
非淋病性尿道炎(NGU) D、E、F、G、H、I、J、K
性病淋巴肉芽肿(LGV) L1、L2、L3
鹦鹉热 鹦鹉热衣原体
TWAR所致肺炎 肺炎衣原体

  其他由衣原体引起的疾病有:附睾丸、直肠炎、粘液脓性宫颈炎、子宫内膜炎、前庭大腺炎、输卵管炎、肝周围炎Reiter综合征、结膜炎等。

  【诊断说明】

  (一)抗原检测

  1.直接涂抹染色(DT)法 传统的结膜刮片和宫颈拭子经姬姆萨或碘染色检查上皮细胞浆内有无包涵体是衣原体检查常用的筛选试验。如果操作和标本采取得当,其特异性强,结果可靠,但敏感性差,尤其是碘染色,只能检查含糖原的包涵体。

  2.细胞培养法 用于衣原体培养者,常用经放线菌酮处理的单层McCoy细胞。经孵育后,用荧光标记的抗体、酶结合的单克隆抗体、碘或姬姆萨染色,胞浆中出现特征性的包涵体,即可考虑有衣原体的存在。本法的敏感性为80%~90%。由于细胞培养法费时费力,且条件和技术要求较高,不能作为临床常规检查方法,因此不适用于大规模筛选及流行病学调查。

  3.酶联免疫吸附试验(ELISA)ELISA是用来检测临床标本中衣原体抗原的一种有效方法。所用抗体多为衣原体属脂多糖单克隆或多克隆抗体,特异性强。本法对婴儿结膜炎检测的敏感性和特异性分别为88%和94%,鼻咽部感染检出率和特异性分别为87%和92%。以此法检测1529例生殖道标本,并与培养法结果比较,其敏感性男性为91%,女性为88%;特异性均为99%。本法具有简便快速的特点,适用于大量标本的检测,但与细菌有交叉反应,可出现假阳性,尤其是鼻咽部标本。

  4.直接免疫荧光法(DFA) 本法简便、快速、特异性好,敏感性和特异性随标本部位及人群而异。新生儿结膜炎的阳性率达100%,(而组织培养为94%)鼻咽部标本的敏感性为85%,特异性为75%。宫内膜和输卵管等部位的标本较培养法敏感。它还用于精液、直肠及因运输或保存不当使衣原体失活标本的检测。用多克隆荧光抗体检测可诊断衣原体感染,但不能区别其类型,单克隆荧光抗体可直接定型,识别的是沙眼衣原体的原生小体,而非较大且少见的细胞内包涵体。荧光显微镜的质量和操作技术均可影响结果。对操作熟练者来说,本法的敏感性和特异性至少和ELISA相同。DFA可代替细胞培养法,以筛选生殖道感染中等至高度流行的年轻人群及确诊有症状的新生儿结膜炎。

  5.斑点免疫结合法(DIBA)本法是以微孔薄膜作固相载体,吸附抗原后进行的抗原抗体反应,在膜上出现着色斑点为阳性结果。其敏感性为100%,特异性为92.4%。与细胞培养法比较,其符合率为96.7%。DIBA适用于大批量标本的检测,但结果需3天。

  6.核酸探针 随着分子生物学技术的发展,DNA杂交技术已进入衣原体检测领域。以82S标记7Md质粒制备的探针,检出Ct的敏感性和特异性分别为91%和80%。用沙眼衣原体性病淋巴肉芽肿(LGV)-Ⅱ的质粒DNA和LGV-I的染色体DNA作探针,可特异性地检测沙眼衣原体的15个血清型抗原,而与单纯疱疹病毒(HSV),淋球菌等41种微生物无交叉反应。检测范围可达10~100pgDNA.用血清学、单克隆抗体及组织培养鉴定为阴性的某些标本,用DNA探针检测可得到阳性结果。用沙眼衣原体TE-55株全DNA制备分子探针,能特异性地检出衣原体的15个血清型。该探针具有特异性高,敏感性强,完全有可能用于衣原体的临床诊断和分子流行病学调查。原位DNA杂交用于宫颈刮片和直肠活检标本,其结果与培养相似。但也有认为,在生殖道标本检测中,DNA探针不够敏感,特别是培养为弱阳性的标本。医学教育网

  7.聚合酶链反应(PCR)PCR是近年发展起来的新技术,能使核酸分子按几何级数扩增,使样品中极微量的核苷酸分子迅速地扩增,然后通过核酸分子的检测获得极敏感的结果。PCR简便快速,具有高度的敏感性和特异性,且可同时从标本中直接鉴定衣原体的种和型别。从7.5Kb质粒ORF-3选择了一对具有种特异性引物,经40次PCR循环,电泳检测的灵敏度达10-17gDNA.

  (二)抗体检测 抗体检测的价值不大,因生殖道感染无并发症者仍产生低滴度的抗体;约20%急性衣原体尿道炎患者不产生抗体;有人认为IgA意味着现症感染,但PID者可长期存在IgA.衣原体抗体检测的常用方法有以下几种。

  1.补体结合试验(CFT)适用于LGV、鹦鹉热及肺炎衣原体感染的诊断,其敏感度较低。当效价≥1∶32提示为衣原体感染,但不能鉴别其种类。用于LGV的证实试验,要求效价≥1∶64.

  2.微量间接免疫荧光试验 本试验是诊断肺炎衣原体感染最敏感的方法之一。以肺炎衣原体作为抗原进行试验,检测特异性抗体。若双份血清效价呈4倍增加,或单分血清IgM抗体效价≥16,或IgG抗体效价≥512,可诊断为急性感染。既往感染者的IgG抗体效价介于8~256之间。临床上依据血清学试验可将肺炎衣原体感染分为原发和继发两种。原发感染IgM出现早、效价高,IgG出现较晚,IgA反应较弱或不出现。继发感染IgG反应迅速,一般不出现IgM和CF抗体。因此,抗体检测应根据标本采集时间,结合临床资料综合分析才能得出正确结论。

  【治疗说明】

  沙眼衣原体对四环素、多西环素、米诺环素、红霉素、利福平均敏,而且对磺胺类药物如复方磺胺甲噁唑(SMZ-TMP)也敏感。β-内酰胺、氨基糖甙类抗生素及万古霉素、壮观霉素无效。有效治疗的疗程需7~21天。

  鹦鹉热肺炎及衣原体肺炎均需采用四环素类及红霉素。磺胺类无效。

  【预防说明】

  外膜抗原为主要的疫苗候选抗原,但尚无获突破性进展。

  鹦鹉热肺炎、肺炎衣原体肺炎的治疗、预防见呼吸系统篇。

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