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TF/FⅦa体外诱导大肠癌LOVO细胞系表达MMP-7mRNA的研究

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  该项研究目的是观察组织因子/活性凝血七因子(TF/FⅦa)诱导大肠癌LOVO细胞系表达基质金属蛋白酶7(MMP-7)mRNA及信号传导途径。

  方法采用构建靶向组织因子基因干扰的RNAi质粒并稳定转染LOVO细胞获得TFRNAiLOVO细胞系,Westernblot检测干扰效率;RT-PCR观察100nmoL/LFV0a刺激0、4、8、12、24h后LOVO细胞中MMP-7mRNA的变化,Northernblot证实时间效应及测定0、10、50、100、200nmol/LFV0a刺激后的MMP-TmRNA水平;100nmol/LFV0a分别刺激LOVO细胞0、4、8、12、16、24h,Westernblot测定p-P38的水平;Northernblot分别检测预先使用10mmol/LP38阻断剂SB2035800.5h再以100nmol/LFⅦa刺激LOVO细胞8h及100nmol/LFⅦa刺激TFRNAiLOVO细胞系8h后MMP-TmRNA水平。结果Northernblot结果显示FV0a刺激MMP-TmRNA表达存在时间、浓度依赖性;Westernblot测定FVKa刺激p-P38表达存在时间依赖性。应用P38通路阻断剂SB203580后MMP-7mRNA基因表达下降59.2%,转染组织因子干扰质粒的LOVO细胞中,MMP-7mRNA的表达水平较LOVO细胞组下降48%。

  得出结论活性Ⅶ因子与组织因子结合诱导体外大肠癌LOVO细胞系表达MMP-7mRNA,其机理可能与P38通路有关。

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